ИФА

Иммуноферментный анализ широко используется для диагностики всевозможных инфекций как острых, так и хронических, а также скрытых форм, которые протекают без клинических симптомов. Также этот метод применяют для контроля течения хронических заболеваний.

Иммуноферментный анализ представляет собой комплекс реакций, как видно из названия, иммунной и ферментативной. Иммунная реакция производит связывание биологических молекул, элементов клетки или микроорганизма, которые собственно и пытаются обнаружить, а ферментативная реакция позволяет увидеть и измерить результат иммунной реакции.

Что же такое иммунная реакция и что такое антиген?

Иммунные реакции – это специфические реакции связывания антигена с антителом с образованием иммунного комплекса. Что это значит?

На поверхности каждой клетки любого организма имеются особые структуры, которые называются антигены. Антигены в целом – это молекулы, которые несут информацию о клетке (ее происхождении, назначении и т.д.) На поверхности каждой клетки обязательно присутствуют видовой и индивидуальный антиген. Видовой антиген используют клетки иммунной системы для опознавания «свой – чужой». Иммунная клетка связывается с подозрительной клеткой и проводит опознание именно по индивидуальному антигену. В памяти иммунной клетки «записано» как выглядит «свой антиген». Таким образом, если антиген подозрительной клетки совпадает с описанием «свой антиген», значит, эта клетка собственного организма и опасности не представляет. Тогда иммунная клетка «отвязывается» и уходит. А если антиген не совпадает с описанием «свой», тогда иммунная клетка идентифицирует эту клетку как «чужой», а значит потенциально опасный для всего организма. В этом случае иммунная клетка не «отвязывается», а начинает уничтожать опасный объект. Точность такого иммунологического узнавания 99,97%!

Антитело – это особая молекула, расположенная на поверхности иммунной клетки. Именно антитело и связывается с антигенами подозрительной клетки. Далее антитело передает информацию внутрь клетки, где происходит опознавание, и получает обратный сигнал двух видов «свой» или «чужой». При сигнале «свой» антитело разрушает связь с антигеном и отпускает клетку. При сигнале «чужой» ситуация разворачивается иначе. Антитело не разрывает связь с антигеном, а наоборот, посылая специфические сигналы, вызывает «подкрепление». Биологически это означает, что другие антитела, находящиеся в другой части клетки, начинают перемещаться к участку, откуда идет сигнал опасности, и также образуют связь между собой и пойманным антигеном. В конце концов, антиген оказывается окружен со всех сторон и прочно привязан. Такой комплекс антиген+антитело называется иммунный комплекс. С этого момента начинается утилизация антигена.

Ферментативная реакция – это химическая реакция, при которой одно вещество под действием фермента превращается в другое. Вещество, на которое действует фермент, называется субстратом. А вещество, которое получается в результате воздействия фермента, называется продуктом реакции. Причем особенность ферментативной реакции такова, что определенный фермент действует только на определенный субстрат. Такое свойство фермента узнавать «свой» субстрат называется сродством. Таким образом, каждый фермент проводит только одну, специфичную для него реакцию. В иммуноферментной диагностике используются такие ферментативные реакции, продуктом которых являются окрашенные вещества. Для вычисления их концентрации по окрашенному раствору используют простой химический метод – колориметрия. При этом измеряется плотность окраски раствора, а по плотности окраски вычисляют концентрацию вещества.

Иммуноферментный анализ бывает прямой и непрямой. В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со специфической меткой. Эта специфическая метка и есть субстрат ферментативной реакции. В непрямом иммуноферментном анализе два этапа. При проведении первого этапа используют немеченые антитела к выявляемым антигенам, а во втором этапе применяют меченые антитела к первым немеченым антителам. То есть получается не прямое связывание антитела с антигеном, а двойной контроль: связывание антител с антигеном, после чего связывание вторых (меченых) антител с комплексом антитело+антиген.

Главное, при назначении исследований методом ИФА необходимо хорошо помнить патогенез заболевания, на которое исследуется животное. Знать на обнаружение чего (антиген или антитело, и если антитела, то какие: G, M, A, D или Е) используется тест-система в данной лаборатории.